商品説明
ゲノムDNAのミスマッチをPCRベースで検出するキットです。
Transcription activator-like effector nuclease (TALEN)やClustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR)/Cas9、Zinc-finger nuclease (ZFN)などをトランスフェクションした細胞や動物の変異確認に使用できます。本キットに含まれるヌクレアーゼは2本鎖DNAの１本鎖領域を特異的に認識・切断します。ミスマッチ部位はヌクレアーゼによって切断され、アガロースゲルやアクリルアミドゲルで検出できます。
特長
- 短時間：4~5時間ですべての操作が完了します
- 簡便：ゲノム抽出からヌクレアーゼ処理まで必要な試薬が全て含まれます(DN-Sure Mutation Discovery Kit Plusのみ)
- 高効率・高感度：1塩基挿入欠失も検出可能
操作概要
テクニカルノート
1塩基挿入・欠失も検出可能
CRISPR/Cas9を導入したマウスの尾をサンプルとし、本キットを用いて変異が検出された個体のシーケンス解析を行いました。その結果、1塩基挿入、2塩基欠失、4塩基欠失の変異体が確認できました。
M：XL-DNA Ladder 100 (KE-2310) 5uL
wt：wild typeサンプル
1：1塩基挿入サンプル
2：2塩基欠失サンプル
4：4塩基欠失サンプル
-：ヌクレアーゼ処理なし
+：ヌクレアーゼ処理あり
アガロースゲル、アクリルアミドゲルで検出可能
CRISPR/Cas9を導入したマウスの尾をサンプルとし、予想変異導入箇所に対して3種類のプライマーを設計し、アガロースゲル/TAEバッファー、アガロースゲル/TBEバッファー、アクリルアミドゲル/TBEバッファーで検出しました。プライマー1：PCR産物250bp、切断断片125bp+125bp、プライマー2：PCR産物500bp、切断断片380bp+120bp、プライマー3：PCR産物500bp、切断断片240bp+260bp。
M：XL-DNA Ladder 100 (KE-2310) 5uL
1：プライマー1
2：プライマー2
3：プライマー3
ヘテロ変異体とホモ変異体
1塩基挿入されたヘテロ変異体とホモ変異体について本キットを用いて検出を行いました。通常の方法にて検出を行ったところヘテロ変異体のみ検出できました。また、アニーリング時に変異導入サンプルとwild typeサンプルを1：1で混合することでホモ変異体も検出できました。
M：XL-DNA Ladder 100 (KE-2310) 5uL
he：ヘテロ変異体
ho：ホモ変異体